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豬腦鈉素ELISA試劑盒的操作要領(lǐng)

瀏覽次數(shù):339發(fā)布日期:2025-02-12
  豬腦鈉素(BNP)是一種由心臟分泌的利鈉肽,在心血管疾病的診斷和治療中具有重要意義,豬腦鈉素ELISA試劑盒采用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)校準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中豬腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)濃度。
 
  豬腦鈉素ELISA試劑盒的操作步驟:
 
  1.加樣:標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn),每個(gè)濃度設(shè)定平行孔,加入50μl不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品;空白孔設(shè)定1個(gè)孔,加入50μl蒸餾水作為空白對(duì)照孔;待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl,使樣品稀釋度為5倍。
 
  2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 
  3.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
 
  4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
 
  5.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
 
  6.溫育:操作同2。
 
  7.洗滌:操作同4。
 
  8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
 
  9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
 
  10.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
豬腦鈉素ELISA試劑盒
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